Методика выполнения измерений массовой концентрации органических кислот в напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №24-08 от 04.03.2008
ФР.1.31.2008.01732

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика выполнения измерений распространяется на вина виноградные, оригинальные и плодовые, напитки винные, соки и сокосодержащие напитки, виноматериалы виноградные и плодовые, сусла; и устанавливает определение массовой концентрации органических кислот (щавелевой, уксусной, лимонной, винной, яблочной, суммы молочной и янтарной) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Метод обеспечивает получение результатов измерений массовой концентрации определяемых органических кислот в пробах напитков в диапазонах, представленных в таблице 1.

Таблица 1. Диапазоны измерения массовой концентрации органических кислот в пробе напитка.

Анализируемая кислота Диапазон измерения
массовой концентрации,
мг/л
Щавелевая кислота 50-500
Лимонная кислота 100-4000
Винная кислота 500-3000
Янтарная и молочная
кислоты (сумма)
500-5000
Яблочная кислота 100-5000
Уксусная кислота 100-3000

3. Пробоподготовка

Отбор проб вина, винных напитков, соков и сокосодержащих напитков, виноматериалов, сусла осуществляют в стеклянные емкости, предварительно вымытые и тщательно высушенные.

Пробоподготовка проб вина, винных напитков, соков и сокосодержащих напитков, виноматериалов, сусла состоит из стадий отбора пробы, разбавления пробы водой бидистиллированной в два раза, проведения процесса твердофазной экстракции ТФЭ части разбавленной пробы (1/5 по объему) на картриджах strata C18-T.

При наличии взвешенных частиц отобранную пробу предварительно центрифугируют, супернатант (надосадочную жидкость) фильтруют с помощью одноразового шприца через фильтрующую нейлоновую насадку, очищенную пробу разбавляют водой бидистиллированной в два раза, проводят твердофазную экстракцию ТФЭ части разбавленной пробы (1/5 по объему) на картриджах strata C18-T.

Хранение проб производят в стеклянных емкостях.

Блок-схема процедуры пробоподготовки


4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов органических кислот, подготовленной пробы воды.

Для хроматографического разделения органических кислот необходимо использовать изократическую высокоэффективную хроматографическую систему со спектрофотометрическим детектированием в УФ-области.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы из навесок кислот; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с спектрофотометрическим детектором;
  • персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром для Windows XP» версии 1.5 или 2х.
  • Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: Rezex ROA-Organic Acid 300х7,8 мм 8 мкм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: Carbo-H+ 4х3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: 0,005 N раствор серной кислоты;
  • скорость потока: 0,5 мл/мин;
  • объем петли: 20 мкл;
  • детектирование: спектрофотометрическое, длина волны 210 нм
  • * При длине волны 254 нм детектируется пик сорбиновой кислоты, отклик пика бензойной кислоты очень слабый. Поэтому, при анализе бензойной кислоты, а также смеси сорбиновой и бензойной кислот детектирование следует проводить при длине волны 230 нм.

    В рамках данной методики возможно определение таких компонентов как кофеин, аспартам, сахарин. При необходимости измерения их содержания в напитках, наряду с сорбиновой и бензойной кислотами, выбор длины волны детектирования обусловлен наличием в образце сильно окрашенных пищевых красителей.

    Градуировку проводят по градуировочным растворам (во всем диапазоне определяемых концентраций) не реже 1 раза в квартал, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

    4.2. Определение количественного содержания органических кислот в пробе напитка.

    Для определения количественного содержания компонентов пробы (органических кислот) проводят хроматографический анализ одного из градуировочных растворов и далее хроматографический анализ подготовленной пробы. Для достоверности измерений хроматографический анализ как градуировочного раствора, так и подготовленной пробы проводят не менее 2 раз подряд.

    Используя установленное программное обеспечение – «МультиХром для Windows XP» в отчете или над пиком (в зависимости от установок опций «ВИД») по окончании измерения автоматически определяется результат в виде концентрации определяемых кислот. Для получения результата необходимо провести два параллельных измерения (получить две хроматограммы).

    За результат измерений принимают среднее арифметическое значение из двух параллельных измерений умноженное на два, т.к. в процессе пробоподготовки производилось разбавление исходной пробы в два раза.



    Copyright © АО "Аквилон"