Методика выполнения измерений массовой доли дезоксиниваленола в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №33-08 от 04.03.2008
ФР.1.31.2008.04631

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика выполнения измерений распространяется на муку пшеничную, в т.ч. макаронные изделия, ржаную, тритикалевую, кукурузную, ячменную, просяную (пшенную), рисовую, гречневую, сорговую; бараночные, сухарные изделия; хлеб и хлебобулочные изделия (булки); кондитерские изделия (пирожные, торты); сою, пряности, орехи, семечки; ячменную муку, крупу, хлопья; и устанавливает метод определения массовой концентрации дезоксиниваленола при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спектрофотометрического определения.

2. Диапазон измерений

Значение ПДК для дезоксиниваленола в муке пшеничной, в т.ч. макаронных изделиях, ржаной, тритикалевой, кукурузной, просяной (пшенной), рисовой, гречневой, сорговой, орехах, кондитерских изделиях (торты, пирожные), бараночных, сухарных изделиях, хлебе и хлебобулочных изделиях (булки) согласно СанПиН 2.3.2.1078-01 (п. 1.4.4) составляет 0,7 мг/кг (700 мкг/кг). Значение ПДК для дезоксиниваленола в муке ячменной, крупе ячменной, ячменных хлопьях согласно СанПиН 2.3.2.1078-01 (пп. 1.4.3, 1.4.4) составляет 1,0 мг/кг (1000 мкг/кг).

Данная методика позволяет определять содержание дезоксиниваленола в продуктах питания в концентрациях от 0,35 до 2,0 мг/кг (350 – 2000 мкг/кг).

3. Пробоподготовка

Для анализа дезоксиниваленола используют свободные от посторонних примесей и продуктов жизнедеятельности животных и микроорганизмов (плесени) пробы.

Твердые изделия (макароны, сушки, сухари) предварительно измельчают в блендере до состояния гомогенной массы.

Орехи, кондитерские изделия (торты, пирожные), хлеб и хлебобулочные изделия (булки) для обеспечения однородности пробы и удаления избыточной влаги смешивают с натрием сернокислым в соотношении 1:3 (по массе) и измельчают в блендере до состояния гомогенной массы.

Пробы муки (различных сортов) и пряностей в виде порошка (перец, корица) не требуют предварительного измельчения.

Измельченную (гомогенизированную) пробу продукта экстрагируют хлористым метиленом, используя УЗ-ванну, в колбе с полиэтиеновой пробкой. Колбу с экстрактом помещают в холодильной камеру (температура +5°С) для осаждения твердых частиц. После осаждения твердого слоя верхний слой (супернатант) декантируют в центрифужные пробирки и центрифугируют. Супернатанты из центрифужных пробирок фильтруют в мерный стеклянный цилиндр с помощью пластикового одноразового шприца через уплотненную в шприце пробку из фильтровальной бумаги. Фильтрат отдувают до заданного объема, приливают заданный объем гексана, содержимое цилиндра перемешивают с помощью УЗ-ванны. Полученный раствор подвергают очистке с помощью твердофазной экстракции на картриджах strata NH2. Собранный элюат оставляют при комнатной температуре на время не менее чем 20 мин.

Блок-схема процедуры пробоподготовки


4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов дезоксиниваленола, подготовленной пробы продукта.

Для хроматографического определения дезоксиниваленола необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему со спектрофотометрическим детектированием.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы из ГСО дезоксиниваленола в ацетонитриле* или из ГСО дезоксиниваленола в смеси бензол – ацетонитрил (98:2)*; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

* Для приготовления градуировочных растворов ГСО растворяют в 20 мМ растворе дигидроортофосфата калия и далее в растворе подвижной фазы.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с спектрофотометрическим детектором;
  • персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром для Windows XP» версии 1.5 или 2х.
  • Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: Synergi Hydro-RP 250х4,6 мм 4 мкм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: С18, 4x3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза раствор дигидроортофосфата калия KH2PO4 (20 мМ) в смеси ацетонитрил – вода (1:9);
  • скорость потока: 0,9 мл/мин;
  • объем петли: 20 мкл;
  • температура: 50°С;
  • детектирование: спектрофотометрическое, длина волны 222 нм.
  • Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят не реже 1 раза в 2 недели, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

    4.2. Определение количественного содержания дезоксиниваленола в пробе продукта

    Для определения количественного содержания компонента пробы (дезоксиниваленола) проводят хроматографический анализ одного из градуировочных растворов и далее хроматографический анализ подготовленной пробы. Для достоверности измерений хроматографический анализ как градуировочного раствора, так и подготовленной пробы проводят не менее 2 раз подряд.

    Используя установленное программное обеспечение – «МультиХром для Windows XP» в отчете или над пиком (в зависимости от установок опций «ВИД») по окончании измерения автоматически определяется результат в виде концентрации в пробе, введенной в хроматограф (но не в исходном образце, взятом для исследования!).

    Для получения результата необходимо провести как минимум два параллельных измерения (получить две хроматограммы). За результат измерений принимают среднее арифметическое значение дезоксиниваленола в концентрате анализируемой пробы Cхр, мкг/л.

    Массовую концентрацию дезоксиниваленола в анализируемой пробе (в исходном образце) Х, мкг/кг рассчитывают по формуле:

    где:
    Схр – среднее значение концентрации дезоксиниваленола, полученное в результате хроматографирования в двух параллельных измерениях [нг/мл];
    V1 – объем исходного экстракта, фактически равный объему хлористого метилена, взятого для первичной экстракции (60 мл) [мл];
    V2 – объем отфильтрованного экстракта (фильтрата), взятого для дальнейшей обработки, (25 мл) [мл];
    V3 – объем элюата после проведения ТФЭ (около 1,5 мл, объем необходимо измерить мерной градуированной стеклянной концевой пипеткой на 2 мл) [мл];
    Kэкстр.1 – коэффициент первичной жидкостной экстракции хлористым метиленом;
    KТФЭэкстр.2 – коэффициент твердофазной экстракции дезоксиниваленола;
    mпр. – масса пробы продукта, взятого на анализ [г].

    Copyright © АО "Аквилон"