Методика выполнения измерений массовой доли жирных кислот в жирах и маслах животных и растительных, маргаринах, жирах для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №36-08 от 04.03.2008
ФР.1.31.2008.04633

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает процедуру измерений массовой доли жирных кислот в жирах и маслах животных и растительных, маргаринах, жирах для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Метод основан на разрушении сложноэфирных связей триглицеридов пробы посредством щелочного гидролиза с высвобождением жирных кислот и, после хроматографического разделения в изократическом режиме, последующем их детектировании при помощи низкотемпературного детектора светорассеяния.

2. Диапазон измерений

Диапазон измерения массовой доли жирных кислот, определяемых по МВИ:

  • лауриновая кислота: 12–96 %;
  • миристиновая кислота: 5–50 %;
  • линолевая кислота: 5–50 %;
  • пальмитиновая кислота: 5–50 %;
  • олеиновая кислота: 5–50 %;
  • стеариновая кислота: 5–50 %.
  • 3. Пробоподготовка

    Подготовка проб к измерениям включает следующие этапы:

  • щелочной гидролиз сложноэфирных связей триглицеридов анализируемого продукта с высвобождением жирных кислот;
  • отбор аликвоты гидролизата;
  • подготовка пробы для ввода в хроматограф.
  • Для анализа готовят две параллельные пробы.

    Блок-схема процедуры пробоподготовки


    4. Проведение хроматографического анализа

    4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов жирных кислот и подготовленных проб

    Для хроматографического разделения жирных кислот необходимо использовать изократическую ВЭЖХ систему с детектированием по светорассеиванию.

    Для проведения анализа предварительно готовят раствор элюента (подвижной фазы), градуировочные растворы из навесок кислот; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

    Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с детектором светорассеяния низкотемпературным испарительным 75;
  • персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром для Windows XP» версии 1.5 или 2х.
  • Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: «Synergi Fusion-RP» 250х4,6 мм 4 мкм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: «Synergi Fusion-RP» 4х3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: раствор ацетонитрил–вода–CH3COOH (110:12:3 об.ч.);
  • скорость потока: 0,9 мл/мин;
  • температура: 20 °С;
  • объем петлевого дозатора: 10 мкл;
  • детектирование: по светорассеянию; температура испарительной трубки: +40°C; давление газа на входе в детектор: 3,0 бар; коэффициент усиления выходного сигнала: 1,0.
  • В связи со специфическими физико-химическими свойствами жирные кислоты при их детектировании методом светорассеяния вызывают нелинейный отклик сигнала детектора в определяемом диапазоне концентраций. По этой причине при градуировке хроматографа аппроксимацию полученных данных производят с использованием квадратичной зависимости вида Y = k2X2+ k1X + k0.

    Контроль стабильности градуировочной характеристики выполняют перед началом работ в день выполнения измерений. Регистрируют не менее двух хроматограмм. При отклонении среднего значения результатов измерений градуировочного раствора более чем на 10% от значения соответствующего данному раствору по градуировочной характеристике и/или изменении времен удерживания более чем на 5% от значений текущей градуировки, повторную градуировку хроматографа выполняют во всем диапазоне измерений. Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят также для каждой новой партии реактивов, при замене колонки и после ремонта хроматографа.

    4.2. Определение массовой доли жирных кислот в пробе

    Для получения окончательного результата измерений необходимо провести анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполнить по два измерения (получить по две хроматограммы).

    Результат измерений (Сi) – массовая концентрация i-ой жирной кислоты в пробе, введенной в хроматограф [мг/см3], рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации. За результат измерений принимают среднее арифметическое значение из двух параллельных измерений.

    Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки, пробу перед вводом в хроматограф разбавляют. Верхняя граница диапазона градуировки составляет: для лауриновой кислоты – 16 мг/см3, для миристиновой, линолевой, олеиновой, пальмитиновой и стеариновой кислот – 8 мг/см3. Разбавление учитывают при расчете.

    Массовую долю i-ой жирной кислоты в рабочей пробе (Хi,м.д.), г/кг, рассчитывают по формуле:

    , где:

    Ci – среднее значение массовой концентрации i-ой жирной кислоты в пробе, введенной в хроматограф [мг/см3];
    Vх – объем пробы, подготовленной для анализа [см3];
    mпр – масса пробы продукта [г];
    mнав – масса навески эмульсии [г].
    mгидр – масса гидролизата пробы [г].

    mгидр = mК,М,гидр – mк+м, где
    mК,М,гидр – масса колбы, мешальника и реакционной смеси [г];
    mк+м – масса колбы и мешальника [г].

    Пересчет результатов анализа из [г/кг] в [%] осуществляют по формуле:



    Copyright © АО "Аквилон"