Методика выполнения измерений массовой концентрации охратоксина А в вине, соках и безалкогольных напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №35-08 от 04.03.2008
ФР.1.31.2008.04628

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает метод измерений массовой концентрации охратоксина А в вине, соках и безалкогольных напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Данная методика позволяет определять содержание охратоксина А в концентрациях от 0,5 до 100 мкг/дм3.

3. Пробоподготовка

Подготовка проб включает следующие этапы:

  • извлечение (экстракция) охратоксина А из пробы;
  • очистка и концентрирование экстракта;
  • подготовка пробы для ввода в хроматограф.
  • Для анализа готовят две параллельные пробы.

    Блок-схема процедуры пробоподготовки

    4. Проведение хроматографического анализа

    4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов охратоксина А и подготовленной пробы

    Для хроматографического определения охратоксина А необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему с флуориметрическим детектором.

    Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы охратоксина А в смеси ацетонитрил – раствор аммония хлористого; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

    Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с флуориметрическим детектором;
  • персональный компьютер  с установленным программным обеспечением «МультиХром для Windows XP» версии 1.5 или 2х
  • .

    Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: «Synergi Hydro-RP» 4 мкм 250х4,6 мм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: «С18 Aq» или «С18» 4x3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: раствор аммония хлористого молярной концентрации 20 ммоль/дм3, pH 9,6–9,8 – ацетонитрил (86:14);
  • скорость потока: 0,75 см3/мин;
  • объем петлевого дозатора: 20 мкл;
  • температура: комнатная;
  • детектирование: флуориметрическое, λex 365±2 нм, λem 400-460 нм; уровень чувствительности детектора (RFU) – 0,005.
  • Градуировку проводят по градуировочным растворам во всем диапазоне измеряемых концентраций не реже 1 раза в 2 недели, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

    4.2. Определение количественного содержания охратоксина А в пробе

    Для определения количественного содержания охратоксина А необходимо провести анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполнить по два измерения (получить по две хроматограммы). Массовая концентрация (Схр) охратоксина А в пробе, введенной в хроматограф, рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации. По результатам двух измерений для каждой из параллельных проб рассчитывают среднее арифметическое значение массовой концентрации охратоксина А.

    Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки (100 нг/дм3), пробу перед вводом в хроматограф разбавляют подвижной фазой. Разбавление учитывают при расчете.

    Массовую концентрацию охратоксина А в анализируемой пробе продукта Х, [мкг/дм3] рассчитывают по формуле:

    где:
    Схр – среднее значение массовой концентрации охратоксина А в пробе, введенной в хроматограф [нг/см3];
    Vпр – объем пробы [см3];
    Vконц – объем пробы после концентрирования [см3];
    Kэкстр – коэффициент первичной жидкостной экстракции этилацетатом.

    За результат измерений принимают среднее арифметическое значение массовой концентрации охратоксина А в двух параллельных пробах.



    Copyright © АО "Аквилон"