Методика выполнения измерений массовой доли охратоксина А в пищевых продуктах, продовольственном сырье и комбикормах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №42-09 от 21.08.2009
ФР.1.31.2012.13727

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает метод измерений массовой доли охратоксина А в зерне, зерновых, крупяных, зернобобовых и масличных культурах, муке, крупе, хлебе, хлебобулочных и макаронных изделиях, орехах, комбикормах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Диапазоны измерений массовой концентрации охратоксина А в различных объектах указаны в таблице.

Наименование
объекта
Диапазон
измерений
массовой
доли охра-
токсина А,
мг/кг
Показатель
точности
(границы
относительной
погрешности),
 ±δ, %,
при Р=0,95
Показатель
повторяемости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
повторяемости),
σr, %
Показатель
воспроизводимости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
воспроизводимости),
σR , %
Предел
повторяемости,
 r, %,
P=0,95, n=2
Зерно, зерновые,
крупяные, зернобобовые
и масличные культуры,
мука, крупа, хлеб,
хлебобулочные и
макаронные изделия,
орехи,  комбикорма
от 0,0005
до 0,005 вкл.
35 10 15 28
свыше 0,005
до 0,02 вкл.
25 5 10 15

3. Пробоподготовка

Подготовка проб к измерениям включает следующие этапы:

  • первичное извлечение охратоксина А из пробы;
  • экстракция охратоксина А из пробы методом твердофазной экстракции;
  • очистка пробы на ТФЭ-картридже;
  • – элюирование охратоксина А с ТФЭ-картриджа и подготовка пробы для ввода в хроматограф.

Для анализа готовят две параллельные пробы.

Блок-схема процедуры пробоподготовки

4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов охратоксина А и подготовленной пробы

Для хроматографического определения охратоксина А необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему с флуориметрическим детектором.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы охратоксина А; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с флуориметрическим детектором;
  • персональный компьютер  с установленным программным обеспечением «МультиХром» версии 1.5 или 2х
  • .

    Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: «Synergi Hydro-RP» 4 мкм 250х4,6 мм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: «С18 Aq» или «С18» 4x3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: раствор аммония хлористого молярной концентрации 20 ммоль/дм3, pH 9,6–9,8 – ацетонитрил (81,5:18,5);
  • скорость потока: 0,75 см3/мин;
  • объем петлевого дозатора: 20 мкл;
  • температура: комнатная;
  • детектирование: флуориметрическое, λex 365±2 нм, λem 405-600 нм.
  • Градуировку проводят по градуировочным растворам во всем диапазоне измеряемых концентраций не реже 1 раза в месяц, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

    4.2. Определение количественного содержания охратоксина А в пробе

    Для получения результата измерений проводят анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполняют по два измерения (получают по две хроматограммы). Результат измерений (С) – массовая концентрация охратоксина А в пробе, введенной в хроматограф, рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации.

    Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки (50 нг/см3), пробу перед вводом в хроматограф разбавляют подвижной фазой, но не более, чем в 10 раз. Разбавление учитывают при расчете.

    Рассчитывают среднее арифметическое значение массовой концентрации охратоксина А в пробах, введенных в хроматограф (C1 и C2), по результатам двух измерений для каждой из параллельных проб по формуле

    Сср  = ( С1 + С2 ) / 2

    Массовую долю охратоксина А в анализируемой пробе Спр, [мг/кг] рассчитывают по формуле:

    где:
    Сср – среднее значение массовой концентрации охратоксина А в пробе, введенной в хроматограф [нг/см3];
    V1 – объем толуолового экстракта 50 см3;
    V2
    – объем пробы, взятой на анализ 25 см3;
    V3
    – измеренный объем пробы [см3];
    M – масса пробы 10 г;
    Kэкстр – коэффициент твёрдофазной экстракции 0,75;
    10-3 – коэффициент пересчета в мг/кг;
    Kразб – коэффициент разбавления.

    За результат измерений принимают среднее арифметическое значение массовой доли охратоксина А в двух параллельных пробах.



    Copyright © АО "Аквилон"