Методика выполнения измерений массовой доли меламина в молоке, сухих молочных смесях, сливках, сметане, йогуртах и кисло-молочных продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №45-09 от 10.09.2009
ФР.1.31.2012.13729

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает метод измерений массовой концентрации меламина в молоке, сухих молочных смесях, сливках, сметане, йогуртах и кисломолочных продуктах с содержанием жира до 15% методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Диапазоны измерений массовой доли меламина в различных объектах указаны в таблице.

Наименование
объекта
Диапазон
измерений
массовой
доли
меламина,
мг/кг
Показатель
точности
(границы
относительной
погрешности),
 ±δ, %,
при Р=0,95
Показатель
повторяемости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
повторяемости),
σr, %
Показатель
воспроизводимости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
воспроизводимости),
σR , %
Предел
повторяемости,
 r, %,
P=0,95, n=2
Молоко, сухие молочные
смеси, сливки, сметана,
йогурты, кисломолочные
продукты
от 0,25
до 1,0 вкл.
43 14 22 39
свыше 1,0
до 5,0 вкл.
30 9 14 25
свыше 1,0
до 5,0 вкл.
22 5 9 14

3. Пробоподготовка

Подготовка проб к измерениям включает следующие этапы:

  • первичное извлечение меламина из пробы;
  • экстракция меламина из пробы методом твердофазной экстракции;
  • очистка пробы на ТФЭ-картридже;
  • элюирование меламина с ТФЭ-картриджа и подготовка пробы для ввода в хроматограф.

Для анализа готовят две параллельные пробы.

Блок-схема процедуры пробоподготовки

4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов меламина и подготовленной пробы

Для хроматографического определения меламина необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему с спектрофотометрическим детектором.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы меламина; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с спектрофотометрическим детектором;
  • персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром» версии 1.5 или 2х
  • .

    Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: «Synergi Hydro-RP» 4 мкм 250х4,6 мм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: «С18 Aq» или «С18» 4x3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: раствор н-гептилсульфоната натрия с молярной концентрацией 10 ммоль/дм3 в 1%-ной водной фосфорной кислоте – ацетонитрил (91:9);
  • скорость потока: 0,9 см3/мин;
  • объем петлевого дозатора: 20 мкл;
  • температура: комнатная;
  • детектирование: спектрофотометрическое, длина волны 234 нм.
  • На время удерживания меламина значительное влияние оказывает содержание ацетонитрила в подвижной фазе. Изменение содержания ацетонитрила на 1–2 % может привести к резким колебаниям времени удерживания. В связи с этим градуировку хроматографа и анализ образцов проводят с использованием одного и того же раствора подвижной фазы.

    Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят не реже 1 раза в месяц, а также при смене колонки и/или защитной колонки, при замене веществ и/или реактивов; после проведения ремонта хроматографа, после длительного простоя хроматографа (2 недели и более), при изменении эффективности хроматографической системы и/или чувствительности детектора.

    4.2. Определение количественного содержания меламина в пробе

    Для получения результата измерений проводят анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполняют по два измерения (получают по две хроматограммы). Результат измерений (С) – массовая концентрация меламина в пробе, введенной в хроматограф, рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации.

    Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки 50 мкг/см3), пробу перед вводом в хроматограф разбавляют подвижной фазой, но не более, чем в 10 раз. Коэффициент разбавления учитывают при расчете.

    Рассчитывают среднее арифметическое значение массовой концентрации меламина в пробах, введенных в хроматограф (C1 и C2), по результатам двух измерений для каждой из параллельных проб по формуле

    Сср  = ( С1 + С2 ) / 2

    Массовую долю меламина в анализируемой пробе Спр, [мг/кг] рассчитывают по формуле:


    где:
    Сср – среднее значение массовой концентрации меламина в пробе, введенной в хроматограф [мкг/см3];
    m2 – масса первичного экстракта, [г];
    V1 – объём конечного экстракта [см3];
    Kэкстр – коэффициент твёрдофазной экстракции (0,5-0,6);
    Kразб – коэффициент разбавления.

    За результат измерений принимают среднее арифметическое значение массовой доли меламина в двух параллельных пробах.



    Copyright © АО "Аквилон"