Методика выполнения измерений массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в соках, продуктах переработки плодов и овощей, мёде и мёдсодержащих продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство № 44-09 от 08.09.2009
ФР.1.31.2012.13728

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает метод измерений массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в соках, продуктах переработки плодов и овощей, мёде и мёдсодержащих продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Диапазон измерений массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в объектах указаны в таблице.

<
Наименование
объекта
Диапазон
измерений
массовой
доли 5-гид-
роксиметил-
фурфурола,
мг/кг
Показатель
точности
(границы
относительной
погрешности),
 ±δ, %,
при Р=0,95
Показатель
повторяемости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
повторяемости),
σr, %
Показатель
воспроизводимости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
воспроизводимости),
σR , %
Предел
повторяемости,
 r, %,
P=0,95, n=2
Сок, продукты переработки
плодов и овощей, мёд и
мёдсодержащие продукты
от 0,5
до 5 вкл.
35 9 15 25
свыше 5
до 250 вкл.
25 5 10 14

3. Пробоподготовка

Подготовка проб к измерениям включает следующие этапы:

  • разбавление пробы дистиллированной водой;
  • извлечение 5-гидроксиметилфурфурола из пробы методом твердофазной экстракции;
  • очистка пробы на ТФЭ-картридже;
  • элюирование 5-гидроксиметилфурфурола с ТФЭ-картриджа и подготовка пробы для ввода в хроматограф.

Для анализа готовят две параллельные пробы.

Блок-схема процедуры пробоподготовки

4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов 5-гидроксиметилфурфурола и подготовленной пробы

Для хроматографического определения 5-гидроксиметилфурфурола необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему с спектрофотометрическим детектором.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы 5-гидроксиметилфурфурола; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с спектрофотометрическим детектором;
  • персональный компьютер  с установленным программным обеспечением «МультиХром» версии 1.5 или 2х.
  • Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: «Synergi Hydro-RP» 4 мкм 250х4,6 мм (Phenomenex, США);
  • защитная колонка: «С18 Aq» или «С18» 4x3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: н-гептилсульфонат натрия с молярной концентрацией 5 ммоль/дм3 в растворе ацетонитрил-вода (10:90);
  • скорость потока: 0,8 см3/мин;
  • объем петлевого дозатора: 20 мкл;
  • температура: комнатная;
  • детектирование: спектрофотометрическое, длина волны 280 нм.
  • На время удерживания 5-гидроксиметилфурфурола значительное влияние оказывает содержание ацетонитрила в подвижной фазе. Изменение содержания ацетонитрила на 1–2 % может привести к резким колебаниям времени удерживания. В связи с этим градуировку хроматографа и анализ образцов проводят с использованием одного и того же раствора подвижной фазы.

    Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят не реже 1 раза в месяц, а также при смене колонки и/или защитной колонки, при замене веществ и/или реактивов; после проведения ремонта хроматографа, после длительного простоя хроматографа (2 недели и более), при изменении эффективности хроматографической системы и/или чувствительности детектора.

    4.2. Определение количественного содержания 5-гидроксиметилфурфурола в пробе

    Для получения результата измерений проводят анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполняют по два измерения (получают по две хроматограммы). Результат измерений (С) – массовая концентрация 5-гидроксиметилфурфурола в пробе, введенной в хроматограф, рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации.

    Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки (50 мг/дм3), пробу перед вводом в хроматограф разбавляют подвижной фазой, но не более, чем в 10 раз. Коэффициент разбавления учитывают при расчете.

    Рассчитывают среднее арифметическое значение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в пробах, введенных в хроматограф (C1 и C2), по результатам двух измерений для каждой из параллельных проб по формуле

    Сср  = ( С1 + С2 ) / 2

    Массовую долю 5-гидроксиметилфурфурола в анализируемой пробе Спр, [мг/кг] рассчитывают по формуле:


    где:
    Сср – среднее значение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в пробе, введенной в хроматограф [мг/дм3];
    V1 – объем пробы при первичной экстракции, см3 (V1=25,0 см3);
    V2 – объем пробы, взятой на анализ (V2=4 см3);
    V3 – объем элюата после ТФЭ, см3;
    V4 – объем дистиллированной воды, добавленный к V3, для получения суммарного объёма элюата 4 см3 ;
    M – масса пробы, г (М=5 г);
    Kэкстр – коэффициент твёрдофазной экстракции (0,85);
    Kразб – коэффициент разбавления.

    За результат измерений принимают среднее арифметическое значение массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в двух параллельных пробах.



    Copyright © АО "Аквилон"