Методика выполнения измерений массовой концентрации левомицетина в молоке, мясе и яйцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №01.0 0225/4.11
от 25.01.2011 ФР.1.31.2012.13730

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает метод измерений массовой концентрации левомицетина (антибиотика) в молоке, мясе и яйцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Диапазон измерений массовой доли левомицетина – от 0,005 до 0,1 мг/кг. Метрологические характеристики метода указаны в таблице.

Наименование
объекта

Диапазон измерений
массовой доли
левомицетина,
млн-1
(мг/кг)

Показатель
точности
(границы
относительной
погрешности),
 ±δ, %,
при Р=0,95
Показатель
повторяемости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
повторяемости),
σr, %
Показатель
воспроизводимости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
воспроизводимости),
σR , %
Предел
повторяемости,
 r, %,
P=0,95, n=2
Молоко,
яйцa
от 0,005 до 0,010 вкл. 35 9 14 25
св. 0,010 до 0,10 вкл. 22 6 9 17
Мясо от 0,005 до 0,01 вкл. 50 11 17 31
св. 0,010 до 0,10 вкл. 34 6 9 17

3. Пробоподготовка

Подготовка проб к измерениям включает следующие этапы:

  • извлечение (жидкостная экстракция) левомицетина из пробы;
  • очистка и концентрирование экстракта;
  • подготовка пробы для ввода в хроматограф.

Для анализа готовят две параллельные пробы.

Блок-схема процедуры пробоподготовки

4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов левомицетина и подготовленной пробы

Для хроматографического определения левомицетина необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему с спектрофотометрическим детектором.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы левомицетина; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с спектрофотометрическим детектором;
  • персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром» версии 1.5 или 2х.

Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: Gemini С18 3 мкм 150х4,6 мм;
  • защитная колонка: С18 Aq или С18 4x3,0 мм;
  • подвижная фаза: 0,2% водный раствор ортофосфорной кислоты–ацетонитрил (70:30);
  • скорость потока: 0,7 см3/мин;
  • объем петлевого дозатора: 20 мкл;
  • температура: 40°С;
  • детектирование: спектрофотометрическое, длина волны 280 нм.

Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят не реже 1 раза в месяц, а также при смене колонки и/или защитной колонки, при замене веществ и/или реактивов; после проведения ремонта хроматографа, после длительного простоя хроматографа (2 недели и более), при изменении эффективности хроматографической системы и/или чувствительности детектора.

4.2. Определение количественного содержания левомицетина в пробе

Для получения результата измерений проводят анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполняют по два измерения (получают по две хроматограммы). Результат измерений С (мкг/см3) – массовая концентрация левомицетина в пробе, введенной в хроматограф, рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации по площади пика.

Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки (5 мкг/см3), пробу перед вводом в хроматограф разбавляют подвижной фазой. Коэффициент разведения Kразв учитывают при расчете.

Рассчитывают среднее арифметическое значение массовой концентрации левомицетина в пробах, введенных в хроматограф (C1 и C2), по результатам двух измерений для каждой из параллельных проб по формуле

Сср = ( С1 + С2 ) / 2

Массовую долю левомицетина в анализируемой пробе Xпр, [мкг/кг] рассчитывают по формуле:


где:
Сср – среднее значение массовой концентрации левомицетина в пробе, введенной в хроматограф, мкг/см3;
V1 – объем ацетонитрила, взятый для экстракции (10 см3);
V2 – объем экстракта (10 см3);
V3 – объем пробы после концентрирования, см3;
Kразв – коэффициент разведения образца перед введением в хроматограф (при отсутствии разведения равен 1);
Kэкстр – коэффициент извлечения (см. таблицу);
KТФЭ – коэффициент твердофазной экстракции (см. таблицу);
M1 – навеска образца, г.
  Мясо Яйцо Молоко Вода
Kэкстр 0,5 0,45 0,55 0,5
KТФЭ 0,55 0,75 0,9 0,9

За результат измерений принимают среднее арифметическое значение массовой доли левомицетина в двух параллельных пробах.



Copyright © АО "Аквилон"