Методика выполнения измерений массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот в напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №23-08 от 04.03.2008
ФР.1.31.2008.01736

Назад к списку методик

Описание  Комплект оборудования  Свидетельство  Хроматограммы   

1. Объекты исследования

Настоящая методика выполнения измерений распространяется на напитки (вино и виноматериалы, пиво-безалкогольные напитки и соки) и устанавливает определение массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спектрофотометрического детектирования.

2. Диапазон измерений

Диапазоны измерений массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот в пробе продукта представлены в таблице 1.

Таблица 1. Диапазоны измерения массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот в продукте.

Анализируемая кислота Диапазон измерения
массовой концентрации,
мг/л
Сорбиновая кислота 10-500
Бензойная кислота 20-500

3. Пробоподготовка

Отбор проб вина, напитков безалкогольных, сиропов, кваса, соков фруктовых, пива осуществляют в стеклянные емкости (колбы на 50 мл), предварительно вымытые и тщательно высушенные.

Пробоподготовка состоит из стадий отбора пробы и трехкратного фильтрования пробы через нейлоновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Трехкратное фильтрование обеспечивает удовлетворительную очистку пробы от сопутствующих веществ.

Для напитков, содержащих взвеси (квасы, соки и пр.) пробоподготовка состоит из стадий отбора пробы, центрифугирования и однократного фильтрования супернатанта через нейлоновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Хранение проб производят в стеклянных емкостях.

Блок-схема процедуры пробоподготовки


4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов сорбиновой и бензойной кислот, подготовленной пробы напитка.

Для хроматографического разделения сорбиновой и бензойной кислот следует использовать изократическую высокоэффективную хроматографическую систему со спектрофотометрическим детектированием в УФ-области.

При анализе сорбиновой и бензойной кислот допустимо использовать колонки различной длины (150 мм и 250 мм). Выбор той или иной колонки зависит от наличия их в лаборатории или от предпочтения аналитика.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы из ГСО или навесок солей; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

  • хроматограф жидкостный «Стайер» с спектрофотометрическим детектором;
  • персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром для Windows XP» версии 1.5 или 2х.
  • Условия:

  • изократический режим;
  • колонка: Luna С18(2) 250х4,6 мм или 150х4,6 мм 5 мкм(Phenomenex, США);
  • защитная колонка: С18 4x3,0 мм (Phenomenex, США);
  • подвижная фаза: раствор 22% ацетонитрил/вода + 0,5% H3PO4 для колонки Luna С18(2) 250х4,6 мм; раствор 17% ацетонитрил/вода + 0.5% H3PO4 для колонки Luna С18(2) 150х4,6 мм;
  • скорость потока: 1,0 мл/мин;
  • объем петли: 20 мкл;
  • температура: 35°С;
  • детектирование: спектрофотометрическое; длина волны 230 нм (для анализа сорбиновой и бензойной кислот), 254 нм (для анализа сорбиновой кислоты)*
  • * При длине волны 254 нм детектируется пик сорбиновой кислоты, отклик пика бензойной кислоты очень слабый. Поэтому, при анализе бензойной кислоты, а также смеси сорбиновой и бензойной кислот детектирование следует проводить при длине волны 230 нм.

    В рамках данной методики возможно определение таких компонентов как кофеин, аспартам, сахарин. При необходимости измерения их содержания в напитках, наряду с сорбиновой и бензойной кислотами, выбор длины волны детектирования обусловлен наличием в образце сильно окрашенных пищевых красителей.

    Градуировку проводят по градуировочным растворам (во всем диапазоне определяемых концентраций) не реже 1 раза в квартал, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

    4.2. Определение количественного содержания сорбиновой и бензойной кислот в пробе.

    Для определения количественного содержания компонентов пробы (сорбиновой и бензойной кислот) проводят хроматографический анализ одного из градуировочных растворов и далее хроматографический анализ подготовленной пробы. Для достоверности измерений хроматографический анализ как градуировочного раствора, так и подготовленной пробы проводят не менее 2 раз подряд.

    Используя установленное программное обеспечение – «МультиХром для Windows XP» в отчете или над пиком (в зависимости от установок опций «ВИД») по окончании измерения автоматически определяется результат в виде концентрации определяемых кислот. Для получения результата необходимо провести два параллельных измерения (получить две хроматограммы).

    Массовую концентрацию анализируемых кислот (мг/л) рассчитывают как среднее арифметическое значение из двух параллельных измерений.



    Copyright © АО "Аквилон"